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EmCD CHO-S 203系列培养基FAQ

浏览数量: 0     作者: 本站编辑     发布时间: 2023-07-04      来源: 本站

艾米能斯的EmCD CHO-S 203系列培养基专门针对ExpiCHO-S细胞株开发,支持细胞高密度悬浮培养及高效率瞬时表达。EmCD CHO-S 203基础培养基是化学成分完全限定,不含动物源成分的产品,可以快速生产出毫克级甚至克级的抗体或重组蛋白样品,且质量稳定、安全。目前,我们自主研发的203平台已被广泛应用于生物药企的临床前药物研究及治疗性重组蛋白生产,关于这一方面的咨询也越来越多,今天艾米能斯专门针对Eminence-203平台做了系列FAQ分享给大家。

 一.常见问题(复苏、传代、培养):

Q1:CHO-S细胞株在EmCD CHO-S 203中传代密度多少比较合适,如果超过了怎么办?

答案:CHO-S细胞株的传代密度在4-6×106/mL较为合适,如果超过了这个密度,将细胞以0.5×106/mL的密度传代2-3代,待细胞恢复。

Q2:从原培养基切换这203基础培养基中需要驯化吗?

答案:一般情况下可以直接从原培养基切换到EmCD CHO-S 203基础培养基中传代培养。如CHO-S细胞状态下降,建议进行细胞驯化,驯化后稳定传代三代后再进行实验。

Q3:CHO-S细胞株203培养基中复苏时需要添加谷氨酰胺吗? 按照什么量补加?多久补充一次?转染后需要补加吗?

答案:是的,需要,按照4-6mM/L的浓度添加。一般复苏或传代时补加,转染后不需要添加。

Q4:CHO-S细胞株在EmCD CHO-S 203中培养有少量结团,是否可以通过加抗结团剂调整?

答案:一般有少量结团的话,不需添加抗结团剂,通过传代调整细胞状态即可。如果结团情况较多,有两种方式可以选择:①在传代前取细胞时,等5- 10秒待细胞沉降下来后,取上层没有结团的细胞进行传代。②将细胞过筛网后进行计数传代。

Q5:CHO-S细胞传代时生长缓慢,倍增时间长,或者转染后出现挂壁现象?

答案:CHO-S细胞株在EmCD CHO-S 203基础培养基中传代倍增时间约为17±1 h。首先应确认谷氨酰胺(浓度为6mM)是否添加,其次应确认摇床参数(37°C、 8% CO2、100±5rpm、振幅)是否相同,最后确认细胞来源以及原培养基中是否含有胰岛素或生长因子。

二.常见问题(细胞转染):

Q1:CHO-S细胞转染后如不加203补料能培养几天?添加补料能培养多少天?

答案:根据艾米能斯平台测试结果转染后不加203补料是培养10天,且活率保持在70%左右。转染后添加203补料一般可培养基10-13天。

Q2:203补料的效果如何,转染后表达量跟不加补料的有多大差距?

答案:根据艾米能斯平台测试结果显示添加补料相较于不添加补料表达量提升30%,但不同平台测试结果可能会有差异,建议设置①不加补料 ②加补料 ③ 加平台补料多个测试组进行测试。

Q3:转染后的降温温度和降温时间点怎么选择?

答案:根据艾米能斯平台测试结果,在转染后的24小时降温至32℃,有利于维持细胞状态,提升表达量。同时相较于细胞在培养箱内从37℃逐步降温至32℃,更建议提前准备一台32℃的摇床。

Q4:瞬转后收样时间点如何判断?

答案:一般会按照各自公司的平台工艺确定收样时间点,艾米能斯建议推荐的收样时间点应在第10-12天或者当活率低于60%时。

Q5:转染时稀释质粒和PEI的培养基时初始体积的多少?

答案:稀释质粒和PEI的培养基都是初始体积的5%,所以配置完成的转染试剂体积应该是初始体积的10%。

Q6:使用203系列培养基,脂质体可以表达,PEI没有表达?

答案:PEI转染法作为目前瞬转工艺中最常见的转染方法不表达的可能性很低,但转染效果往往与质粒DNA浓度与PEI浓度有较大联系,建议优化质粒与PEI的浓度,以达到最佳转染效果。

三.常见问题(培养基参数)

Q1:203系列培养基目前能提供什么规格的产品?

答案:EmCD CHO-S 203基础培养基目前我们的液体培养基的规格是1000mL,干粉培养基的规格是10,20,100L。

          EmACF CHO 203补料培养基目前可以提供500mL液体培养基的包装规格。

Q2:EmCD CHO-S 203系列培养基培养基是完全CD培养基吗?

答案:EmCD CHO-S 203培养基是化学成分限定的,不含任何生长因子、水解物、血清、血清替代物、蛋白及任何动物来源组分,保证细胞培养过程的安全性和稳定性。

EmACF CHO 203补料培养基,无动物源性成分,不含生长因子或 L-谷氨酰胺。与EmCD CHO-S 203培养基一起使用,尤其适用于ExpiCHO-S细胞系的瞬时转染,确保其高密度培养和最大化表达。使用这款培养基,可以快速生产出毫克级甚至克级的抗体或重组蛋白样品,且质量稳定、安全。

Q3:203基础/203补料的渗透压是多少?

答案:EmCD CHO-S 203基础培养基渗透压为300 mOsm/kg。  

          EmACF CHO 203补料培养基渗透压为1000 mOsm/kg。

Q4:203基础/203补料中的含糖量分别是多少?

答案:EmCD CHO-S 203基础培养基含糖量为6g/L。  

          EmACF CHO 203补料培养基含糖量为33g/L。



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